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    SARS-CoV-2 假病毒

    SARS-CoV-2 假病


    假病毒描述:

    SARS-CoV-2假病毒以HIV病毒为骨架,外面包被SARS-Cov-2Spike 蛋白,能够感染过表达人ACE2的细胞??捎糜诓馐匝芯孔瓒喜《厩秩氲闹泻涂固寤蚱渌┪?。假病毒只能单次感染,不能复制,安全性高,可在P2级实验室使用。

     

    假病毒参数:

    产品名称

    SARS-CoV-2 假病毒

    货号

    VS-SC-0001

    荧光基团

    eGFPLuciferase

    生物安全防护措施

    P2级实验室

    包装

    100~200ul

    感染滴度

    2×105 TU*(基于hACE2-COS7细胞)

    拷贝数

    108

    保存

    -80

    * TUtransfection unit),1TU=使1个细胞发出绿色荧光。

     

    假病毒制备:

    维通达将Spike蛋白表达质粒、包装质粒、转移质粒共转染到293T细胞内,包装出以SARS-CoV-2-Spike为表面衣壳蛋白的假病毒。假病毒同时带有Firefly LuceGFP标记,可以通过有Firefly LuceGFP检测感染。示意图如下:

    d14abe195395274291be8f9ebc14c8e6-sz_278476.png

    注意事项:

    1) 病毒使用PEG8000浓缩,会有血清蛋白沉淀,外观浑浊,但不影响使用。

    2) 病毒干冰运输,-80℃保存,使用前室温融化。

     

    使用方法:

    1. 第一天,96孔板每孔接种5×103hACE2-COS7细胞。

    2. 第二天,除去培养板里的培养基,新鲜培养基(100ul/孔)与假病毒2×103 TUPolybrene混合(5ug/ml终浓度),加入培养孔,培养板离心(1200g x 2 Hour,4℃)。

    2×103 TU时,luciferase的亮度约为1×106)。

    3. 离心感染的细胞,吸干净培养基,再用PBS洗一次;每孔加入30ul 0.25%的胰酶,37℃孵育5min,加入100ul完全培养基,继续培养。

    4. 感染后继续培养3天(每天换液),进行luc检测,也可以观察eGFP荧光(根据情况更换培养基)。



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